Zestaw do izolacji ludzkich komórek T CD4+ firmy Akadeum zapewnia wysoce wzbogaconą populację zdrowych, żywotnych komórek T CD4+ przy użyciu protokołu, który jest szybki, łatwy i wyjątkowo delikatny dla delikatnych komórek odpornościowych.
Zestaw do izolacji ludzkich komórek T CD4+ firmy Akadeum zapewnia populację ludzkich komórek T CD4+ o wysokiej czystości, które są gotowe do dalszego wykorzystania. Użycie tych mikropęcherzyków do wzbogacenia ludzkich próbek PBMC w komórki T CD4+ przed sortowaniem przepływowym może znacznie skrócić końcowy czas sortowania, pomagając wyizolować więcej komórek dla lepszej nauki. Proces mikropęcherzyków Akadeum jest wyjątkowo łagodny dla komórek, pomagając zachować zdrowie i fizjologię komórek odpornościowych podczas wzbogacania.
Mechanizm działania: Akadeum Human CD4+ T Cell Isolation Kit wykorzystuje metodę selekcji negatywnej do usuwania niepożądanych populacji komórek z próbki, skutecznie wzbogacając ją o interesujące komórki T przy jednoczesnym zachowaniu fizjologii komórkowej. Niepożądane (nie-CD4+ T) komórki są znakowane zoptymalizowanym koktajlem biotynylowanych przeciwciał Akadeum ukierunkowanych na CD8, CD11b, CD14, CD16, CD19, CD36, CD56, CD123, CD235a i TCR-γδ. Pokryte streptawidyną mikropęcherzyki są następnie mieszane z próbką, wiążąc się ze znakowanymi komórkami i unosząc je do górnej części pojemnika na próbkę w celu usunięcia.
Jak to działa? Najpierw do próbki dodawany jest koktajl biotynylowanych przeciwciał Akadeum w celu oznaczenia zanieczyszczonych komórek. Następnie mikropęcherzyki są mieszane z próbką, gdzie wyszukują i wiążą się z niechcianymi komórkami. Po związaniu szybko i delikatnie unoszą niepożądane komórki na powierzchnię. W opcjonalnym etapie wirowania komórki T CD4+ są osuszane, a mikropęcherzyki, komórki związane z mikropęcherzykami i supernatant są łatwo odsysane, pozostawiając nietknięte i wzbogacone komórki T CD4+ szczęśliwe, zdrowe i gotowe do dalszego wykorzystania.
Dodatkowe informacje:
Zestaw zawiera:
Aby uzyskać najlepsze wyniki, zalecane są następujące materiały:
Zestaw do izolacji ludzkich limfocytów T CD4+ firmy Akadeum zapewnia wysoce wzbogaconą populację zdrowych, żywotnych limfocytów T CD4+ przy użyciu naszego szybkiego, łatwego i delikatnego protokołu mikropęcherzyków. Idealna do wzbogacania rzadkich i delikatnych komórek odpornościowych, nowatorska technologia Akadeum Buoyancy Activated Cell Separation (BACS™) zachowuje cenne komórki podczas procesu wzbogacania. Izolacja komórek odbywa się bezpośrednio w pojemniku z próbką, eliminując potrzebę narażania rzadkich i delikatnych komórek na działanie ostrych chemikaliów lub szkodliwych sił ścinających. Ponieważ nie jest wymagany żaden dodatkowy sprzęt, unika się utraty komórek, a zdrowie i fizjologia ludzkich komórek T CD4 + są zachowane. Efektem końcowym jest wysoce czysta populacja komórek T CD4+, które są szczęśliwe, zdrowe i gotowe do dalszego wykorzystania.
Technologia mikropęcherzyków Akadeum wykorzystuje siłę wyporu w szybkim, łatwym i delikatnym przepływie pracy bez potrzeby stosowania dodatkowego sprzętu. To unikalne, delikatne podejście pozwala zachować zdrowie i fizjologię komórek.
Wykorzystaliśmy technologię, która tradycyjnie wymaga dodatkowego sprzętu do osiągnięcia ukierunkowanej separacji komórek i umieściliśmy ją w jednym pojemniku, w którym następuje samoczynna separacja. Brak szkodliwych sił ścinających, brak ekspozycji na siły zewnętrzne, takie jak gradienty magnetyczne. Przestań tracić cenne komórki na rzecz trudnych, przestarzałych technik przetwarzania.
Izolację ludzkich limfocytów T CD4+ z PBMC przeprowadzono przy użyciu zestawu Akadeum Life Sciences Human CD4+ T Cell Isolation Kit (#13210-130). Komórki znakowano CD4-PerCP/Cy5.5 i CD8-PE. Martwe komórki i pozostałości zostały wykluczone z analizy.
Regulacyjne limfocyty T (Treg) stanowią rzadką i ważną populację komórek w układzie odpornościowym. Jako wysoce wyspecjalizowana subpopulacja limfocytów T, Treg stanowią zaledwie 4-10% całkowitej populacji limfocytów T CD4+ i stanowią zaledwie 1-5% wszystkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC), co czyni je rzadkim celem zainteresowania, który może być trudny do wyizolowania w wystarczająco dużej populacji do znaczącej analizy. Ponieważ limfocyty Treg wykazują ekspresję CD4, etap przygotowania próbki przy użyciu mikropęcherzyków Akadeum CD4+ T Cell Microbubbles pozwala na szybkie, łatwe i wyjątkowo delikatne wzbogacenie przed sortowaniem komórek.
Zastosowanie zestawu Akadeum Human CD4+ T Cell Kit przed sortowaniem przepływowym może zapewnić wysoce wzbogaconą populację komórek T CD4+ z próbek PBMC przy użyciu szybkiego, delikatnego i wydajnego protokołu, który 15-krotnie skraca czas końcowego sortowania, jednocześnie poprawiając żywotność komórek i obniżając koszty.
Ilustracja wzbogacania komórek T CD4+ za pomocą zestawu. Przeprowadzono izolację ludzkich komórek T CD4+ z PBMC, komórki oznaczono zgodnie ze wskazaniami i przeanalizowano na cytometrze przepływowym CytoFLEX.
A.) Wykresy przepływu pokazujące przykład przed i po wzbogaceniu komórek T CD4+.
B.) Wyniki wzbogacania komórek T CD4+ przed i po z jednodniowych PBMC (n=7). Martwe komórki i szczątki zostały wykluczone ze wszystkich analiz.
Użycie mikropęcherzyków i mikroprzepływowej cytometrii przepływowej do wzbogacenia komórek Treg stworzyło próbkę, w której populacja limfocytów T CD4+ stanowiła 95-98% komórek w limfocytach, a limfocyty Treg w populacji limfocytów wzrosły ze średnio 1% do 85-94%.
Sortowanie wzbogaconej próbki za pomocą sortera komórkowego WOLF® pozwala uzyskać populację Treg o wysokiej czystości. A.) Odsetek CD4+ T przed wzbogaceniem (zielone słupki) i po sortowaniu wzbogaconym mikropęcherzykami (niebieskie słupki). n=1-2 na dawcę. B.) Odsetek limfocytów Treg przed wzbogaceniem (zielone słupki) i po sortowaniu wzbogacającym mikropęcherzykami (niebieskie słupki). n=1-2 na dawcę.
Zastosowanie szybkich i łatwych mikropęcherzyków Akadeum wzbogacających komórki T CD4+ przed izolacją Treg poprzez sortowanie komórek doprowadziło do znacznego skrócenia całkowitego czasu potrzebnego do uzyskania wystarczającej liczby czystych, żywotnych komórek Treg do dalszych zastosowań, takich jak sekwencjonowanie pojedynczych komórek. Mikropęcherzyki w połączeniu z sorterem WOLF® firmy NanoCellect utrzymały wyjątkową czystość, 15-krotnie skróciły czas wzbogacania i zwiększyły prędkość sortowania bez wprowadzania dodatkowego naprężenia ścinającego.
