Zaawansowane odczynniki Classic++TM 1-Step RT-PCR Kit pozwalają na wydajną syntezę cDNA i PCR w jednej probówce. W skład Master Mix wchodzi polimeraza Classic++TM Hot Start Taq DNA, termostabilna polimeraza nowej generacji pochodzenia rekombinowanego, która posiada aktywność polimerazy 5'→3'. Zawiera on również dwa opatentowane Classic++TM Hot Start mAbs (przeciwciała monoklonalne), które są używane do specyficznego blokowania aktywności polimerazy w temperaturze poniżej 70°C, co pozwala na wygodne ustawienie reakcji w temperaturze pokojowej. Po udanej odwrotnej transkrypcji docelowych cząsteczek RNA, aktywność polimerazy DNA jest przywracana podczas początkowego etapu denaturacji, gdy reakcje amplifikacji są ogrzewane w temperaturze 94-95°C przez dwie minuty. Zablokowanie aktywności polimerazy przed denaturacją matrycy poprawia wydajność poprzez zminimalizowanie lub wyeliminowanie tworzenia dimerów starterów i niespecyficznej amplifikacji. Dodatkowo, w osobnej probówce znajduje się opatentowana cząsteczka 20X M-MLV Reverse Transcriptase (RT) zmieszana ze zoptymalizowanym inhibitorem RNase. Enzym ten może syntetyzować cDNA w zakresie temperatur 45-55°C, zapewniając większą specyficzność, wyższą wydajność cDNA i więcej produktu o pełnej długości niż inne odwrotne transkryptazy. Nasz M-MLV RT nie jest znacząco hamowany przez rybosomalne i transferowe RNA, co czyni go idealnym do syntezy cDNA z całkowitego RNA.
RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) jest stosowana do przekształcania i amplifikacji jednoniciowego szablonu RNA w celu uzyskania obfitego produktu dwuniciowego komplementarnego DNA (cDNA). Jednoetapowa RT-PCR jest odmianą standardowej RT-PCR, w której wszystkie składniki są mieszane w jednej probówce przed rozpoczęciem reakcji. Takie podejście oferuje prostotę i wygodę oraz minimalizuje możliwość kontaminacji.
Zestaw Classic++ 1-Step RT-PCR jest przeznaczony do czułego, powtarzalnego, końcowego wykrywania i analizy cząsteczek mRNA lub całkowitego RNA metodą RT-PCR. Nasza wygodna formuła pozwala na szybką, dokładną i powtarzalną syntezę cDNA i następującą po niej amplifikację PCR w jednej probówce przy użyciu primerów specyficznych dla danego genu, począwszy od różnych szablonów docelowego RNA.
